ریزهمسانه سازی ژن mdsoc1a در وکتور دوگانه گیاهی

چکیده ریزهمسانهسازی ژن mdsoc1a در وکتور دوگانهی گیاهی ژن atsoc1، یکی از ژنهای تجمیع کنندهی مسیرهای چندگانهی گلدهی در گیاه arabidopsis thaliana میباشد، همولوگ آن یعنی mdsoc1a در سیب (malus domestica borkh.) شناسایی و جداسازی گردیده است. این ژن به عنوان فاکتور رونویسی متعلق به خانوادهی mads-box بوده ولی عملکرد آن هنوز مشخص نشده است. فوق تظاهر، خاموشی ژن های گیاهی و آنالیز فنوتیپ های جهش یافته، سه استراتژی معمول برای تعیین نقش ژن ها در گیاهان به شمار می روند. البته برای مطالعهی عملکرد ژنها اغلب از فوق تظاهر استفاده میشود ولی بهتر است از سایر دادههای تکمیلی نیز در تفسیر نهایی استفاده به عمل آید. اولین قدم در آزمایشات ژنومیکس عملکردی به خصوص فوق تظاهر و خاموشی ژن، همسانهسازی ژن مورد نظر در وکتور دوگانهی گیاهی برای بیان آن در گیاهان مدل میباشد. به دلیل طولانی بودن و هزینهبر بودن مراحل همسانهسازی سیستم هایی با قابلیت بالا و کارآمد از نظر هزینه، برای همسانه سازی و آنالیز عملکرد ژن، بسیار مورد نیاز و ضروری می باشند. در این تحقیق یک وکتور دوگانه ی بهبودیافته برای تسهیل همسانه سازی جهت دار معرفی شد و همچنین به خاطر افزایش سطح بیان ژن هدف همسانه سازی را بسیار آسانتر نموده است. برای این منظور ژن gus در وکتور بیان ژن های گیاهی (pbi121) با یک قطعه از پلاسمید pff19 که شامل ناحیهی افزاینده راهاندازcamv 35s ، راهاندازcamv 35s ، m.c.s. و خاتمهدهنده بود جایگزین شد و وکتور جدید pnm106 نامیده شد. سپس ژن mdsoc1a با استفاده از طراحی یک جفت آغازگر که شامل جایگاههای برشی مطابق با وکتور pbi121 بود، در آن همسانهسازی گردید. صحت سازه ها با استفاده از تکنیکهای pcr و نقشه برش آنزیمی مورد تایید قرار گرفت. در مرحلهی بعدی وکتور حامل ژن mdsoc1a یعنی pnm108 به agrobacterium tumefaciens سویه agl1 انتقال داده شد. وکتور pnm106 معرفی شده در این تحقیق میتواند در آینده برای هر دو منظور (فوق تظاهر و خاموشی ژن) در یک مرحله و به طور همزمان مورد استفاده قرار بگیرد.